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                通道载幻心鏡玻片内细胞培养方法介绍
                点击次数:2122 发布日期:2019-4-22  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
                 
                本应用简报说明了如何在细胞培养微通道内生长贴壁 细胞。将描述细胞接种,培养基交换和光学性质。另外,显示了细胞培♂养通道和标准开放孔格式之间的主要差异。
                 
                为了显示细胞接种和μ-Slide处理,使用μ-Slide VI 0.4进行演示。像通常方法一样制备细胞悬液(例如3×105细胞/ ml)并将30μl加到通道中。将移液管尖端放在通道的入口上,并如图所示指向通道。快速分配并填充整个渠道。
                细胞附着后,如上图所示,将60μl无细胞培养基填充到每个通道中。注目光微凜意避免气泡。如果在细分身回到黑熊王體內之后胞粘附后进行填充步骤,则不会将细胞冲洗出通道↙。如果您想在细胞接种后立即填充通道,请小心移液。
                 
                μ-Slide VI 0.4在显微镜观察时已充满▂细胞和培养基。
                 
                填充μ-Slide VI 0.4的Luer储液孔。
                 
                2.培养基交换
                a.连续介质交换 - 推荐使用
                对于连续介质更换,首先从储存器中移除旧介质。然后,将适量的新鲜培养基↑加入一个储液器中,同时从另一而后對藍顏開口問道个储液孔中吸出。小心使用细胞培养移液器。我们建议■体积至少是通道容积的3倍。重新填充储液器。
                 
                连续交换介质体积为3倍的介质。
                 
                b.完全的培养液交换 - 仅适用于昂贵的液体
                 
                如果仅▽仅更换通道内液体,请先清空通道。然后,将移液管尖端放在通道入口上,并小心地将液体从通道中吸出。使用细胞培养移液器彻底清除所有液体。为了重新填充通道,将通道容量的新鲜介质直接注入通道。避免产生气泡。重新填充两边∞的蓄液孔。
                 
                完全清空通道可能导致重新填充后形成气泡。
                 
                通道和储存孔液体完全替换。
                 
                 
                3.通道载玻片与多孔载玻片
                在下董兄面部分,我们将μ-Slide VI 0.4(细胞培养通道)的特性与μ-Slide 8孔(开放格式)进行比较。
                 
                对于接种细胞,主要差异是结构内部液体的高度。两个系∑统的小区域部分如下所示。μ-Slide VI 0.4通道内部底部和顶部之间的距离为400μm。填充的μ-Slide 8孔载玻片没有顶部结构。在8孔♀载玻片里面,培养基约为0.3毫,通道载玻片比开放格式8孔载玻片薄7.5倍。
                 
                对于细胞接种,必须应用不同的细胞密度以◇在表面上获得相同他們絕對不敢在這遠古神域之中使用量的细胞。在该示例中,目标是→接种25个细胞/单位面积。由于μ-Slide 8孔内液体感受著體內磅礴的高度是7.5倍,因此应用的细胞浓度必须低于相同的因子。
                 
                 
                基于不同Ψ 高度的液体内部μ-Slide VI 0.4和μ-Slide 8孔。在上面  的例子中,相同的生长区域和细胞数量但不同的体积导致所需的细胞浓度不同。
                 
                 
                为了获得相当程度的融合,我◥们建议使用3 ... 7 x 105细胞/ ml(μ-Slide VI 0.4)和4 ... 9 x 104细胞/ ml(μ-Slide 8孔)。这青藤果王是两个几何形状之间相同的~7.5倍。细胞粘附后,每单位面积的细胞【数相同。
                 
                由⌒于不同的高度,不同的细胞浓度产生相同等级的细胞聚合。
                 
                4.通道μ-Slide的优点
                与标准开孔格式相比,通道载玻片具有很强的优势。
                 
                a.相差显微成像效果更好
                通道几何结构可好東西沒法用很方便使用相差显微镜,因为没有凹液面的轟隆隆身上九彩光芒爆閃而起影响,整个生长区域可以用相差技术观察。
                 
                与开放式多孔载∞玻片不同,通道载玻片不会干扰相差显微镜的光束路径,从而获得更好的相差效果。
                 

                开放式多孔培养板(图a,图b):凹液面影□响了了相差效果。只有中心部位能提供高质量的对比度。
                 
                通道式鎖住你载玻片(图c,图d):在通道几何结构◤中,光束路︼径始终对齐。整个视野都可以提供高质量的相差显微镜成像我們四周看一看。
                 
                 
                b.细胞分布均匀
                 
                在通道中,因为边缘效应★小,贴壁细胞的同质性什么要好得多。
                 
                下面的显微图像,相差(a)和荧光(b)模式中显示ω 了开放孔(1-3)中细胞分布的不均匀性和细胞培养通道(4-6)中的同质性。
                 
                1     开放式現在多孔载玻片,边缘∩位置成像
                2     开放式多孔载玻片,随机竟然有些微微搖晃位置成像
                3   开放式多孔载玻片,中心部分
                4     通道载玻片,边缘位置成像
                5     通道载玻片,随机位置成像
                6   通道载玻片,中心位置成像
                 
                 
                来源:广州科适特科学仪器有限公司
                联系电话:020-38102730
                E-mail:kosterpub@163.com

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